摘要：猪盛行性伤风（SI）简称猪流感，是由猪流感病毒（SIV）引起的猪的一种地方性呼吸道熏染病。我国猪群中主要盛行的SIV是H1N1和H3N2亚型，而市chang上并无针对H1N1和H3N2的灭活苗，因此有开发猪流感（H1N1、H3N2亚型）二价灭活疫苗的须要。本实验通过评估3种差异佐剂的猪流感（H1N1、H3N2亚型）二价灭活疫苗的清静性和效力，较量3种佐剂在清静性和效力试验上的优弱点，效果显示：在清静性试验中，三种佐剂疫苗免疫仔猪通针性均优异，免疫后未泛起不良反映，体温处于正常规模内；在效力试验中，为进一步开发猪流感（H1N1、H3N2亚型）二价灭活疫苗提供依据。

关jian字：猪流感；二价灭活疫苗；清静性；效力；

猪盛行性伤风（SI）简称猪流感，是由猪流感病毒（SIV）引起的猪的一种地方性呼吸道熏染病。SIV为单股负链RNA病毒，属于正黏病毒科A型流感病毒属。其病毒粒子为多形性，直径80～120 nm，有囊膜。SIV存在于病猪的鼻液、气管（或支气管）渗透液和肺组织中，主要撒播途径是猪只之间鼻秠uan堑闹苯咏哟ズ涂掌，暴发多发生在气温转变较大时，如天气骤变的晚秋、早春及严寒的冬季，临床以突发高热、咳嗽、呼吸难题、重复发作、发病率高、殒命率低为特征。

凭证SIV囊膜上的柱状血凝素（HA或H）和蘑菇状的神经氨酸酶（NA或N），SIV可以分为差异的亚型和毒株。现在，已知的血清型有H1N1、H1N2、H1N7、H3N2、H3N6、H4N6、H5N1、H9N2等8种差异血清亚型。我国研究者已先后从广西、成都、河南、湖南、江西、贵州、广东、福建等地疏散到H1N1亚型或H3N2亚型的SIV。

现在市chang上使用的SI疫苗都是灭活苗，主要由单价苗和双价苗。在西欧国家，SI灭活苗已实现商品化供应，例如，Interrvet公司的猪流感（H1N1）—猪支原体肺炎二联灭活苗猪流感（H1N1、H3N2）二价灭活苗等。在海内，仅有武汉科宿世物股份有限公司和中牧实业股份有限公司成都药械厂生产猪流感H1N1亚型灭活疫苗（TJ株）。然而，我国猪群中主要盛行的SIV是H1N1、H1N2和H3N2亚型，H1N1、H3N2亚型的盛行性远凌驾H1N2亚型，而海内市chang上并无针对H1N1和H3N2的二价灭活苗，针对流感病毒在海内甚至天下规模内的盛行性和多变性，开发猪流感（H1N1、H3N2亚型）二价灭活疫苗势在必行。本公司的猪流感（H1N1、H3N2亚型）二价苗的抗原生产工艺已基本稳固，现尊龙凯时就差异佐剂的猪流感H1N1、H3N2亚型）二价灭活疫苗举行清静性试验和效力试验报道如下。

1. 质料与要领

1.1 实验动物

25-30日龄的康健易感猪

1.2 试验分组

佐剂HP-6组，佐剂HP-8组，佐剂HP-1组

1.3 红细胞凝集试验（HA试验）和血凝抑制试验（HI试验）

1.3.1 HA试验

用加样器向96孔V型板各孔内加入25μl心理盐水，并于每排第1孔内划分待检尿囊液，并加入上述待检阳性尿囊液作为对照。混淆多ci后，吸25μl加入第2孔，依ci倍比稀释至第11孔，弃去25μl，第12孔不加阳性血清作为对照。向各孔加入1%的鸡红细胞悬液25μl，振动混匀，置于37℃经20分钟后判断效果。HA的滴度以2为底的对数log2体现。

1.3.2 HI试验

HI试验接纳β法，用4个血凝单元抗原。用加样器向96孔V型板各孔内加入25μl心理盐水，并于每排第1孔内划分待检血清，并加入上述待检阳性血清作为对照．混淆多ci后，吸25μl加入第2孔，依ci倍比稀释至第11孔，弃去25μl，第12孔不加阳性血清作为对照。后在各孔中加入待检的4个单元的抗原25μl。充拭魅振荡后，在37℃作用15分钟，后向各孔加入1%的鸡红细胞悬液25μl，振动混匀，置于37℃经20分钟后判断效果。HI的滴度以2为底的对数log2体现。

1.4 清静性试验

将所有猪分为4组，每组5头。免疫组划分颈部肌肉注射疫苗2ml(2头份)，对照组注射2ml的心理盐水。注射前3日至注射后3日，逐日上下战书各丈量体温一ci并纪录。注射30日后，纪录体重zeng长qing况，另每组选2头猪剖解，视察注射部位吸收qing况。

1.5 效力试验

将所有猪分为4组，每组10头，，其余均为免疫组。3个免疫组划分颈部肌肉注射疫苗1ml/头份，对照组注射相同剂量的心理盐水。所有试验组于免疫后1周、2周、3周、4周、5周采血，疏散血清，用HI要领检测抗体效价。

2. 效果   

2.1 清静性试验

2.1.1 体温反映

将差异佐剂的猪流感（H1N1、H3N2亚型）二价灭活疫苗划分颈部肌肉注射疫苗2头份，视察注射前3日至注射后3日，逐日上下战书体温转变qing况。佐剂HP-8，HP-6和HP-1在免后3天内，均未泛起显着的体温反映，其体温值在猪正常的体温规模38.5-39.5℃内（图1）。这说明3种佐剂的疫苗免疫仔猪后处于正常体温规模内，。

图1 差异佐剂接种猪体瘟转变图

2.1.2 注射部位吸收qing况

各组划分颈部肌肉注射差异佐剂的猪流感（H1N1、H3N2亚型）二价灭活疫苗2头份。注射30日后，每组选2头猪剖解，视察注射部位，縞i誵ing况。佐剂HP-8（图2）、HP-6（图3）、HP-1（图4）在注射30日后，其注射部位吸收优异，没有泛起显着的结块和颜色转变。

图2 HP-8组注射部位剖解

图3 HP-6组注射部位剖解

图4 HP-1组注射部位剖解

2.2 效力试验

向免疫组划分注射差异佐剂的猪流感（H1N1、H3N2亚型）二价灭活疫苗颈部肌肉注射疫苗1头份，每周采血，疏散疏散血清，HI检测抗体效价，一连采血5周。较量免后差异的时间，差异佐剂诱导发生的抗体水平的转变qing况。HP-8佐剂组，HP-6佐剂组和HP-1佐剂组均能诱导猪发生H1N1和H3N2的抗体应答（图5和图6）。

HP-8佐剂组，HP-6佐剂组和HP-1佐剂组在免后1周就能诱导猪发生H1N1的抗体应答，且H1N1抗体应答的能一连到免后5周。在诱导发生H1N1抗体应答的历程中，佐剂HP-8，HP-6和HP-1的抗体应答水平随着时间的zeng加有所zeng加，在免后1周抗体水平到达26，在免后3周抗体水平到达27，并将这一抗体水平一连到免后5周。在免后4周抗体水平到达最高，到达28（图4）。较量这3中佐剂组抗体发生H1N1的抗体水平，在免后5周内，HP-1组和HP-6组抗体呈线性zeng长的趋势，HP-1抗体值高于HP-6组，而HP-8在免后4周泛起了抗体峰值，且峰值高于其他两免疫组，在5周内的免疫一连期尚不能确定HP-1和HP-8哪个佐剂对H1N1抗体发生更佳。

HP-8佐剂组，HP-6佐剂组和HP-1佐剂组在免后1周就能诱导猪发生H3N2的抗体应答，且H3N2抗体应答的能一连到到免后5周。在诱导发生H3N2抗体应答的历程中，佐剂HP-8，HP-6和HP-1的抗体应答水平随着时间的zeng加有所zeng加。HP-8佐剂组在免后1周抗体水平到达24，在免后3周抗体水平到达最高27，但免后4-5周内，抗体水平略微下降，在26-27之间。HP-6佐剂组在免后1周抗体水平到达23，在免后3周抗体水平到达最高26，但免后4-5周内，抗体水平略微下降，在25-26之间。HP-1佐剂组在免后1周抗体水平到达25，在免后3周抗体水平到达27，并在免后5周抗体水平到达最高28（图5）。从H3N2抗体的整体zeng长纪律来看，以HP-1佐剂最佳，HP-8佐剂组ci之，HP-6佐剂组相对较差。

图 5 差异佐剂免疫后H1N1抗体水平转变图

图6 差异佐剂免疫后H3N2抗体水平转变图

3. 讨论

在筛选四川地域的阴性猪的历程中，81%的非免猪H1N1抗体为阳性，，75%的非免猪H3N2的抗体为阳性，这批注H1N1和H3N2亚型在猪群中普遍盛行。同时，非免猪群的H1N1的抗体水平远高于H3N2，这说明在四川地域的猪群中H1N1是主要盛行株。

大量的研究批注，灭活疫苗清静性好、免疫效果确实、免疫一连时间长等优点。在本实验中，HP-8佐剂组，HP-6佐剂组和HP-1佐剂组均体现出了上述特点。清静性试验效果显示，HP-8佐剂组，HP-6佐剂组和HP-1佐剂组没有体温反映（图1），其注射部位吸收优异（图2和图3）；效力试验效果显示，HP-8佐剂组，HP-6佐剂组和HP-1佐剂组均能诱导猪发生H1N1和H3N2的抗体应答，且免疫一连时间长（图4和图5）。但从抗体发生的时间，一连期，抗体水一律多个方面综合评价，HP-1佐剂的效力稍高于另外两种佐剂。

本研究效果批注，3种佐剂组均具有清静性好，吸收优异的特点。3种佐剂均能诱导猪发生H1N1和H3N2的抗体应答，且抗体一连期相似，这为进一步开发猪流感（H1N1、H3N2亚型）二价灭活疫苗提供依据。

参考文献（略）